本试验指南描述了某些内分泌活性物质的体内筛选试验，其中性成熟的雄性和产卵的雌性鱼被放在一起，并在其生命周期的有限部分（21天）暴露于化学物质中。该测定包括雌激素和雄激素活性的筛选以及芳香化酶抑制。该测定方法在胖头鱼（Pimephales promelas）、日本花呢（Oryzias latipes）和斑马鱼（Danio rerio）身上进行了验证；然而，斑马鱼不允许检测雄激素活性。在21天暴露期结束时，根据使用的物种，在雄性和雌性中测量一个或两个生物标志物终点，作为测试化学品的雌激素、芳香化酶抑制或雄激素活性的指标；这些终点是卵黄蛋白原和第二性征。Vitellogenin在肥头鱼、日本花呢鱼和斑马鱼中测量，而次生性别特征仅在肥头鱼和日本花呢鱼中测量。
