质粒RK2在广泛的革兰氏阴性菌中稳定复制的能力是不寻常的。复制起源（oriV）和质粒编码的起始蛋白（TrfA；以33和44kDa的形式表达）对于RK2复制是必需的。为了检测与大肠杆菌无关的细菌中的起始事件，分离编码恶臭假单胞菌和铜绿假单胞菌的复制解旋酶DnaB的基因，并将其用于构建蛋白质表达载体。将纯化的蛋白质与E.coli DnaB一起在RK2-oriV下测试活性。在宿主特异性DnaA蛋白和TrfA蛋白的存在下，每种解旋酶都可以在RK2起源处被募集和激活。大肠杆菌或P.putida DnaB对TrfA-33或TrfA-44具有活性，而铜绿假单胞菌DnaB需要TrfA-4才能激活。此外，与大肠杆菌DnaB解旋酶不同，在没有ATP酶辅助蛋白的情况下，两种假单胞菌解旋酶都可以在oriV下递送和激活。因此，在复制起点装载必需的复制解旋酶并不普遍需要DnaC样辅助ATP酶。
